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ELISA试剂盒的实验中操作细节要有哪些?
发布时间:2020-06-20 点击次数:876次
   ELISA试剂盒实验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。
  1.保持每次加样的两步要有太大的差异,所以有条件的应该考虑使用排枪。
  2.枪内有气泡应该先快速打空枪,将气泡排出。
  3.板内有气泡可以考虑用空枪将其吸出,不过小心不能碰到底板!
  4.尽量用排枪,做好笔记,一次做完,避免下次还要做标准。
  5.加完现色液后,放入一个可推拉的抽屉内,就可以避光振荡了。
  操作注意:
  1.吸取样品时,加样枪吸头不应黏附多余的液体;加样时不可90度向孔中滴加液体,这样会导致液体残留在吸头上,加样不准确。
  2.不要将吸头伸入孔中,一方面若接触孔底可能压弯吸头,另一方面可能会将孔中的液体吹起来,加样不准确。
  其实给ELISA试剂盒样本加样并不是什么大问题,很多事情往往是被操作者们给想复杂了,只要有足够的耐心与认真,就一定可以做出漂亮的实验!
  在ELISA试剂盒试验中的各项操作细节有许多,如尽量少用排枪、勤换枪头,细节决定成败,这对于试验室科研工作者来说也是如此。加样时由低浓度向高浓度加,由于这样能够削减跳孔的几率。而整个试验的*后要害便是成果的处理办法了,那么在在今日的技术文章中。
  为您带来的是ELISA试剂盒成果分析办法:
  1:ELISA试验中样品都要做复孔或三孔,然后计算每个浓度规范品的均匀OD值,复孔的变异系数应该小于20%。
  2:均匀OD值减去空白孔的OD值。
  3:制造规范曲线。
  以减去本底后的OD值为X轴,规范品的浓度为Y轴,运用作图软件得出一个适宜的计算办法。主张运用适宜的软件来作图,比方CurveExpert 1.4。这款软件能够给出许多种办法(比方直线、半对数、对数、四参数方程等)并从中挑选一条*适宜的方程。要想检验某条曲线是否与表中数据符合,能够将规范品的浓度作为未知数,将对应的OD值带入该方程,计算出规范品的浓度,得到的成果应该与实际浓度很挨近(+/-10%)。挑选拟合度的那条曲线。
  如果呈现规范曲线的线性欠好,或平行性欠好(双孔对照孔的OD值不同很大),或呈现跳孔的现象,可能引起的原因有酶标板孔间彼此污染、洗板后未能尽快进行下一步操作、添加样品或其它试剂时操作的办法不对、孵育位置避光性不佳或盖板膜没有密封好使得水分蒸腾、酶标板孔问参加的试剂量不同,相对应的解决办法是加样时请当心勿将液体溅人另一孔中,人工洗板时也请当心,勿将洗涤液溅人另一微孔中、在洗板后及时进行下一步操作、添加试剂时请悬空滴入,牢记勿将枪头接触到板孔内,吸取不同试剂瓶中的液体时就要替换一次枪头、确认孵育环境不透光,盖板膜将酶标板密封好、运用已校正过的微量加样器,如将次参加液体时枪头上留有一滴的液体滴下,那么将今后枪头上留有的液体也滴下,以保证参加液体体积的一致性。

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